加入日期：2022.01.05 瀏覽次數(shù)：3004次
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| 在科學技術迅速發(fā)展的今天，凝膠電泳作為非常重要的科研實驗方法早已被廣泛應用于蛋白和核酸的分離。而電泳圖像的采集、保存和相關處理分析主要依靠凝膠成像系統(tǒng)。凝膠成像系統(tǒng)中Western blot是一項在復雜樣本中檢測蛋白質表達水平的技術，至今已有超過40年的歷史，并成為了蛋白質研究中常用的工具之一。在凝膠成像系統(tǒng)中中蛋白質電泳凝膠如何拍攝? 蛋白質凝膠電泳操作說明： 1、把上述處理的樣品按1:1(V/V)與2×SDS凝膠加樣緩沖液混合，100℃加熱3分鐘，使蛋白質變性; 2、取出變性蛋白質，立即放于冰上。樣品如粘稠可進行超聲對DNA進行剪切，以最大功率處理0.5～2分鐘應能有效地將裂解液粘稠度降至可控水平(注意：此步驟一定要在冰上進行); 3、如有沉淀以10 000g將樣本4℃離心10分鐘，將上清液移至另一管中，棄去沉淀物; 4、計算使用Western印跡法檢測靶蛋白所需要的樣本量，一般Western印跡法技術檢測中等大小蛋白的檢出下限約為1～5ng。在厚0.75mm的SDS聚丙烯酰胺凝膠上，每個泳道可加樣100μg而不致過多; 5、 用玻璃微量進樣器按順序加樣，注意沿加樣孔底上樣，否則樣品容易漂走。加樣量不宜過多或過少，一般15～20ul為宜。沒上樣的加樣孔中加1?SDS凝膠加樣緩沖液; 6、用注射器排除兩玻璃板底部的氣泡，將電泳裝置接通電源(正極接下槽，負極接上槽)，凝膠上所加電壓為8v/cm,當溴酚藍前沿進入分離膠后，電壓可提高到15V/cm,繼續(xù)電泳直至溴酚藍到達分離膠底部(約4小時)，關閉電源; 7、從電泳裝置上卸下玻璃板，放入一瓷盤中，用一注射器吸取若干毫升電泳緩沖液，將針頭插入一玻璃板與凝膠之間，小心不要將凝膠刺破，沿玻璃板從左至右注入電泳緩沖液，將玻璃板與凝膠分開?？拷筮吳腥ヒ唤且詷嗣髂z的位置; 8、如不需做免疫檢測可直接用考馬斯亮藍染色。 | |
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